摘要刀豆蛋白A磁珠Concanavalin AConA磁珠因其能够特异性识别α-D-葡萄糖及α-D-甘露糖糖链结构在糖蛋白富集、细胞捕获以及表观遗传研究中应用广泛。随着CUTRUN、CUTTag等实验方法的发展ConA磁珠也逐渐成为细胞核捕获的重要工具。本文基于BioMag Plus Concanavalin A磁珠产品资料对其工作原理、产品参数、应用方向、实验流程以及使用注意事项进行整理。关键词刀豆蛋白A磁珠,Concanavalin A磁珠,糖蛋白分离磁珠,凝集素磁珠,BioMag Plus ConA,磁珠法糖蛋白纯化,CUTRUN磁珠,CUTTag磁珠ConA磁珠是什么为什么会用于糖蛋白和细胞捕获研究在生物分离实验中层析柱和磁珠分离方法通常依赖特异性亲和结合体系实现目标分子的捕获。常见的配体包括链霉亲和素、抗体以及凝集素等其既可用于捕获带有特定标签的目标物也能够分离天然表达相应结合位点的细胞和生物大分子。刀豆蛋白AConcanavalin ACon A属于植物凝集素的一种具有独特的糖类识别能力可特异性结合α-D-葡萄糖以及α-D-甘露糖末端糖基因此长期被用于标记和分离血清、细胞裂解液中的糖蛋白以及表达聚糖结构的细胞。同时Con A也被用于细胞黏附研究、淋巴细胞活化研究以及糖相关药物开发等研究领域。BioMag Plus Concanavalin A属于将Con A共价固定在功能化磁性微球表面的磁珠产品可用于糖蛋白、多糖富集、细胞捕获以及染色质分析等研究。由于采用磁珠分离方式因此整个实验过程中无需离心和过柱可实现快速、温和且高回收率的目标分离。BioMag Plus ConA磁珠产品参数产品参数如下悬浮体系10 mM PBS含0.1%叠氮钠颗粒组成磁性微球BioMag粒径范围1.50–3.00 μm标称粒径约1.5 μm浓度5 mg/mL微球状态已过滤BioMag Plus ConA磁珠主要特点BioMag Plus ConA采用Con A共价偶联方式固定于磁性微球表面因此配体稳定性较高不易脱落同时能够减少非特异性结合现象。ConA能够识别α-D-葡萄糖以及α-D-甘露糖糖链结构从而提高目标糖蛋白和糖基化生物分子的富集能力。磁珠本身粒径较均一沉降较少重悬性能良好同时磁响应速度较快。产品浓度为5 mg/mL可直接使用无需额外预处理。产品兼容手动操作及高通量自动化流程并可用于CUTRUN、CUTTag等实验流程。BioMag Plus ConA磁珠应用方向糖蛋白及聚糖富集ConA磁珠可用于血清、组织提取液以及细胞裂解液中的糖蛋白、多糖及糖肽富集和分离。表观基因组研究ConA磁珠能够用于细胞核捕获并适用于CUTRUN、CUTTag以及Hi-Plex CUTTag实验流程相比传统ChIP方法可减少背景并简化实验步骤。值得注意的是CUTRUN技术开发过程中BioMag ConA产品曾作为关键试剂参与相关方法建立。细胞分选和细胞活化研究ConA磁珠能够实现含特征糖基细胞的标记与分选并用于淋巴细胞活化和细胞黏附研究。微生物及外泌体研究对于具有特殊糖被结构的细菌、病毒样颗粒以及外泌体样本也可通过ConA磁珠进行捕获和富集。糖生物学研究ConA磁珠还可用于凝集素-糖相互作用研究、糖基化修饰分析以及潜在生物标志物筛选等方向。BioMag Plus ConA磁珠实验流程1、样本准备血清样本使用10 mM PBS按照1:20比例进行稀释。2、磁珠预处理取适量磁珠悬液置于磁力架进行分离弃除保存液后使用结合液洗涤并平衡2–3次。3、结合反应加入样本后于室温旋转孵育10–30分钟使糖蛋白与磁珠充分结合。4、洗涤步骤磁分离后弃除上清液并使用洗涤液重复洗涤2–3次以减少非特异性吸附。5、洗脱步骤加入洗脱体系葡萄糖或高pH缓冲液孵育10–30分钟后收集洗脱产物。6、后续分析所得样本可进一步用于SDS-PAGE、Western Blot、质谱分析以及染色质检测实验。使用过程中的注意事项ConA糖结合活性需要Ca²⁺和Mn²⁺维持因此实验过程中应避免加入EDTA等金属螯合剂否则会影响ConA结合能力。磁珠禁止冷冻、高速离心以及完全干燥否则可能出现不可逆聚集并导致活性下降。产品含有叠氮钠因此废液处理时需使用大量水冲洗。产品仅用于科研实验用途。FAQ1、ConA磁珠主要用于哪些实验主要用于糖蛋白、多糖富集、细胞核捕获以及CUTRUN、CUTTag等实验。2、为什么实验中不能使用EDTAConA活性依赖Ca²⁺和Mn²⁺维持空间结构EDTA会螯合金属离子并导致结合能力下降。3、是否适用于CUTRUN实验可以并且已成为较常用的细胞核捕获方案。4、如何保存磁珠建议2–8℃避光保存避免冷冻和反复冻融。5、适用样本有哪些包括细胞裂解液、血浆、组织匀浆、微生物样本以及外泌体样本等。参考资料An efficient targeted nuclease strategy for high-resolution mapping of DNA binding sitesSingle-cell CUTTag to identify cell states in normal and disease tissueSingle-cell CUTTag analysis of chromatin modifications in differentiation and tumor progression更多相关技术资料可参考https://www.mine-bio.com/polysciences-microspheres/86057-3.shtml?utm_sourcecsdnutm_mediumreferralutm_campaignpolysciences_article本文基于刀豆蛋白A磁珠、BioMag Plus Concanavalin A、Con A磁珠、糖蛋白/多糖富集磁珠、CUTRUN与CUTTag相关参考文献、技术应用文章曼博生物整理支持糖生物学、表观遗传、免疫与蛋白质研究相关应用。
