Biotinyl-BNP-32 (human) ;Bio-SPKMVQGSGCFGRKMDRISSSSGLGCKVLRRH
一、基础信息
- 中文全称:N 端生物素修饰人成熟 32 肽脑钠肽
- 英文全称:Biotinyl-Brain Natriuretic Peptide-32 (human)
- 三字母序列:Biotin-Ser-Pro-Lys-Met-Val-Gln-Gly-Ser-Gly-Cys-Phe-Gly-Arg-Lys-Met-Asp-Arg-Ile-Ser-Ser-Ser-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys-Lys-Val-Leu-Arg-Arg-His
- 单字母序列:Bio-SPKMVQGSGCFGRKMDRISSSSGLGCKVLRRH
- 氨基酸总数:32 aa
- 分子式:C143H246N50O42S4
- 分子量:3466.09
- 结构修饰说明:
- N 端氨基共价偶联生物素(Biotin / Bio);
- 分子内环化:Cys¹¹ 与 Cys²⁷ 形成分子内二硫键(Cys11,27 disulfide bridge),为受体结合必需环状骨架;
- C 端游离羧基,无酰胺、焦谷氨酸、乙酰修饰;无双硫键以外侧链修饰。
- 结构式:
二、理化性质
1.紫外定量:含 2 分子 Met、Phe,280 nm 具备稳定紫外吸收,可直接分光光度法定量。
2.稳定性要点
- 含两个 Met 残基,极易氧化失活;分子内二硫键易被还原剂破坏,全程禁用 DTT、β- 巯基乙醇;
- 芳香残基仅 Phe,建议全程避光操作减少肽链降解;
- 仅 N 端生物素封闭氨基端,C 端无保护,易被羧肽酶、金属内切酶降解,工作液必须现配现用。
3.酸碱特性
酸性残基:Asp;大量碱性残基:Lys、Arg、His;整体呈碱性多肽;适配 pH 6.0–7.4 PBS、人心肌原代细胞培养液、人血浆缓冲体系。
4.溶解性
Ser、Gln、Gly 高密度亲水骨架搭配带电氨基酸,水溶性极佳,中性缓冲液常温可完全溶解。
5.空间构象
Cys11-Cys27 二硫键构成 BNP 特征环状核心,是 NPR-A/NPR-B 受体识别关键区域;N 端生物素暴露于环外侧,不干扰配体与受体结合亲和力。
三、来源背景
BNP-32 是人心室心肌细胞分泌的成熟活性利钠肽,心衰、心肌损伤时大量释放;N 端生物素标记保留天然二硫环结构,是人 NPR-A/NPR-B 受体专用亲和探针。
四、生物学功能
- 高亲和力激活 NPR-A/NPR-B,强效利尿、利钠、扩张血管,降低心脏前 / 后负荷;
- 抑制 RAAS 系统、抑制心肌成纤维细胞增殖,拮抗心肌肥厚与纤维化;
- 舒张血管平滑肌、保护血管内皮、调节血压稳态;
- 生物素标签特异性结合链霉亲和素,Pull-down 富集细胞膜利钠肽受体及其下游信号蛋白,用于竞争性结合、荧光示踪组织受体分布与受体内吞。
五、科研应用
- 人原代心肌细胞、主动脉内皮细胞 Pull-down 捕获 NPR-A/NPR-B 受体及互作蛋白;
- 利钠肽受体激动剂 / 拮抗剂体外筛选、配体竞争结合实验;
- 心力衰竭、心肌肥厚、高血压、心肌损伤体外细胞模型;
- ANP / 人 BNP / 大鼠 BNP/CNP 利钠肽家族跨物种构效对比研究;
- 免疫荧光 / 化学发光示踪人心脏、血管组织 NPR 受体定位。
六、溶解与储存规范
- 溶解:pH7.2 无菌 PBS 冰浴避光配制,体系严禁添加任何还原剂,缩短敞口时间防止 Met 氧化、二硫键断裂;
- 冻干粉:短期 - 20 ℃避光密封;长期分装充氮气隔氧,-80 ℃避光储存;
- 工作液:单次分装避免反复冻融;2~8 ℃避光存放不超过 3 天,功能实验现配现用。