Biotinyl-GRF (1-43) (rat)

一、基础信息

  • 中文全称:N 端生物素修饰大鼠生长激素释放激素 1–43 全长肽
  • 英文全称:Biotinyl-Growth Hormone-Releasing Factor (rat, 1-43)
  • 三字母序列:Biotin-His-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Glu-Ile-Met-Asn-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Arg-Ser-Arg-Phe-Asn
  • 单字母序列Bio-HADAIFTSSYRRILGQLYARKLLHEIMNRQQGERNQEQRSRFN
  • 氨基酸总数:43 aa
  • 分子式:C225H361N77O66S
  • 分子量:5232.90
  • 结构修饰说明
  1. N 端共价修饰 Biotin(Bio,生物素酰基);
  2. 线性直链多肽,C 端游离羧基,无 C 端酰胺、二硫键、环化、焦谷氨酸、乙酰侧链修饰;
  3. 无额外位点侧链标记。
  • 结构式

二、理化性质

1.紫外定量:含多处 Tyr、Phe、Met,280 nm 紫外吸收强,可直接紫外分光光度法定量。

2.稳定性要点

  • 含 Met,极易氧化降解;配液、分装全程冰浴,减少空气敞口接触;长期冻干粉分装充氮气隔氧保存;
  • Tyr、Phe 均为强光敏残基,溶解、分装、储存全程避光;
  • 无脯氨酸,肽链整体柔性;仅 N 端生物素封闭氨基端,C 端无酰胺保护,易被羧肽酶、内肽酶水解,工作液必须现配现用。

3.酸碱特性
酸性残基:Asp、Glu;碱性残基:His、Arg、Lys;整体偏弱酸性;适配 pH 6.0–7.4 PBS、大鼠垂体原代细胞培养液、大鼠血浆缓冲体系。

4.溶解性
Thr、Ser、Asn、Gln 亲水残基搭配大量带电酸碱氨基酸,水溶性优良,中性缓冲液常温完全溶解。

5.空间构象
中段形成保守两亲 α 螺旋,为大鼠 GHRHR 受体识别核心;N 端生物素位于螺旋外侧,不干扰配体与受体结合亲和力。

三、来源背景

大鼠下丘脑分泌内源 GRF (1-43),序列、长度与人、猪、绵羊 GRF 差异显著;N 端偶联生物素作为啮齿类专属亲和探针,用于大鼠垂体、神经内分泌受体互作实验。

四、生物学功能

  1. 特异性激活大鼠垂体 GHRH 受体,刺激生长激素 GH 合成与释放;
  2. 调控大鼠生长发育、脂肪代谢、应激反应、昼夜节律;
  3. 参与中枢摄食、焦虑、衰老相关内分泌信号通路;
  4. 生物素标签可结合链霉亲和素树脂,Pull-down 富集大鼠 GHRH 受体及其下游互作蛋白,用于竞争性结合、细胞荧光示踪。

五、科研应用

  1. 大鼠原代垂体细胞 Pull-down,捕获大鼠源 GHRHR 受体与信号结合蛋白;
  2. 啮齿类 GHRH 受体激动剂 / 拮抗剂体外筛选、竞争性结合实验;
  3. 大鼠生长、肥胖、垂体瘤体外细胞模型;
  4. 人 / 家畜 / 大鼠 GRF 跨物种序列、受体亲和力对比构效研究;
  5. 免疫荧光示踪大鼠脑组织、垂体 GHRH 受体分布与内吞过程。

六、溶解与储存规范

  1. 溶解:pH7.2 无菌 PBS 冰浴避光配制,缩短敞口时间降低 Met 氧化;
  2. 冻干粉:短期 - 20 ℃避光密封;长期分装充氮气隔氧,-80 ℃避光储存;
  3. 工作液:单次分装避免反复冻融;2~8 ℃避光存放不超过 3–5 天。