同一个实验,同样的protocol,为什么结果总是不一样?
“这个实验上个月做出来是阳性的,这个月怎么就阴性了?”
“我跟隔壁课题组用的是一模一样的试剂盒,为什么他们做得出来我做不出来?”
这些话,我相信每一个在实验室待过的人都听过,甚至自己说过。当实验结果反复无常、难以重复时,大多数人会从自己的操作上找原因——是不是RNA提得不好?是不是PCR程序设错了?是不是抗体稀释比例不对?
但有一个可能性,很多人从来没有考虑过:你的试剂,从出厂到你手上这段路,可能已经“变质”了。
这不是危言耸听。我讲一个真实发生的案例。
我们实验室和另一个课题组合作做一个qPCR实验,用的是同一品牌、同一货号、同一批次的逆转录试剂盒。他们的数据很漂亮,我们的数据却乱七八糟——Ct值不稳定,熔解曲线出现杂峰。我们反复排查了操作流程、仪器状态、引物质量,都没问题。
最后,我们把两家实验室的试剂盒做了一次交叉对比。结果发现:我们手上的试剂盒,在运输过程中可能经历了温度波动。我们调出了物流记录——普通快递,夏季运输,在路上走了四天。那个试剂盒里附带的一支酶,活性已经明显下降了。
而合作课题组的试剂盒,是从星元素甄选采购的。他们到货时,冷链包装完好,温度记录仪显示全程温度符合要求。
这个案例让我意识到一个问题:“同样的东西”,在不同的运输条件下,到货时已经不再是“同样的东西”了。
星元素甄选在试剂活性保护上的做法,值得每一个对实验结果负责的实验室了解:
全程冷链,温度可追溯。每一批需要温控的试剂,都配有温度记录仪。你不是在“相信”试剂没问题,而是可以“看到”它确实没问题。
分级包装,对症下药。2-8℃、-20℃、-80℃的产品使用不同的冷链方案,不是用同一种泡沫箱对付所有产品。
到货验收有标准。温度异常怎么办?冰袋化了怎么办?平台有明确的处理流程,不需要用户自己去“赌”试剂还能不能用。
如果你的实验室也遇到过“实验重复不出来”的问题,建议你做一个简单的排查:下一次订货时,注意观察到货时的包装和温度状态。如果冰袋已经化了,如果温度记录仪缺失,如果包装破损——不要犹豫,这可能是你实验结果不稳定的真正原因。
实验操作可以不断优化,但试剂活性一旦在运输中受损,是没有办法“修复”的。保护好试剂到货前的最后一段路,就是保护好你的实验数据。
