ELISA是一种基于抗原-抗体特异性结合原理的高灵敏度免疫检测工具通过将待测物质抗原或抗体吸附到固相载体表面并利用酶标记的抗体或抗原进行特异性识别最终加入相应底物后酶催化底物发生显色反应显色深度与待测物浓度成比例关系从而实现对血清、细胞上清液或组织匀浆等样本中目标因子的精准定量或定性分析。根据实验设计的不同ELISA主要有以下几种类型1、直接法Direct ELISA原理将抗原包被在固相载体如微孔板上加入酶标待测抗体。然后加入底物通过颜色变化判断是否有抗体结合。2、间接法Indirect ELISA原理同样先将抗原包被在固相载体上然后加入待测抗体再加入酶标记的二抗抗抗体。最后加入底物显色。3、夹心法Sandwich ELISA原理使用两种特异性抗体捕获抗体和检测抗体分别识别抗原的两个不同表位形成“夹心”结构。将特异性针对待测抗原的抗体包被于固相载体上向微孔中分别加入标准品或标本其中待测抗原与连接于固相载体上的抗体结合。然后加入生物素化的针对待测抗原的抗体形成夹心将未结合的生物素化抗体洗净后加入HRP标记的亲和素再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测抗原呈正相关。图1 双抗夹心法ELISA检测原理示意图4、竞争法Competitive ELISA原理适用于小分子抗原如药物、半抗原等。将特异性抗体吸附于固相载体随后加入待测抗原标准品和样本和一定量的生物素标记的抗原检测液A使二者竞争与固相抗体结合温育后经洗涤去掉未结合物然后加入HRP标记的亲和素经过温育和彻底洗涤后加入底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色并在酸的作用下转化成最终的黄色。待测标本浓度越高标记抗原和抗体的结合就越受到抑制显色愈浅。显色的深浅与酶量呈正相关而与样品中待测物质含量呈负相关。图2 竞争抑制ELISA检测原理示意图图3 不同类型ELISA试剂盒的特点选择ELISA试剂盒的注意事项1. 明确检测目的确定是检测抗原还是抗体是定量还是定性。2. 选择合适类型根据待测物质的性质选择直接、间接、夹心或竞争型ELISA。3. 关注试剂盒质量选择经过验证的优质试剂盒确保准确性和稳定性。4. 注意保存条件大多数试剂盒需在低温4℃或-20℃保存避免重复冻融。5. 遵循说明书操作严格按照试剂盒说明书进行操作以保证结果可靠。
